OBRAZOWANIE WIELOPARAMETROWE
Liczenie komórek
Jak związek wpływa na liczebność poszczególnych populacji komórek?
Sama łączna liczba komórek nie pokazuje, jak na związek reagują poszczególne populacje. Mikroskopia wieloparametrowa pozwala rozróżnić oznakowane populacje w tej samej hodowli i zmierzyć, jak zmienia się ich liczebność pod wpływem związku.
DANE EKSPERYMENTALNE
Przebieg badania
Ekspozycja
Hodowle jednorodne lub kokultury poddajemy działaniu serii stężeń związku, z kontrolą rozpuszczalnika i kontrolami referencyjnymi.
Identyfikacja
Znakujemy jądra, a w razie potrzeby stosujemy markery populacji lub barwienia żywych i martwych komórek. Obrazy rejestrujemy za pomocą zautomatyzowanej mikroskopii.
Pomiar
Wyodrębniamy komórki na obrazach, przypisujemy je do populacji na podstawie markerów i porównujemy liczebność między warunkami. Profile odpowiedzi normalizujemy względem odpowiednich kontroli.
Co mierzymy
Łączna liczba komórek i liczebność poszczególnych populacji, odpowiedzi względne oraz krzywe zależności od stężenia. Odpowiednie barwienie żywych i martwych komórek pozwala uzupełnić badanie o pomiar żywotności.
Interpretacja
Mniejsza liczba komórek może wynikać ze spowolnienia proliferacji, śmierci komórek lub obu procesów. Samo liczenie nie pozwala ich rozróżnić. Pomagają w tym uzupełniające pomiary proliferacji i śmierci komórkowej.
Projekt badania
Model komórkowy, markery populacji, czas ekspozycji i ustawienia analizy obrazów dobieramy do badania. Przykład przedstawia odpowiedź zmierzoną w jednej kokulturze, a nie selektywność we wszystkich modelach biologicznych.